ua ru

Рекомендации по проведению ИФА

Корректное проведения иммуноферментного анализа достигается при обязательном выполнении следующих требований:

  1. Качественная подготовка посуды и дистиллированной воды
  2. Правильная подготовка исследуемого материала.
  3. Правильная работа с автоматической пипеткой.
  4. Соблюдение пунктов инструкции к тест-системе и условий проведения ИФА:
  5. соблюдение температурного режима и времени инкубации
  6. качественное промывание планшета на всех этапах проведения ИФА
  7. точность работы оборудования - пипеток, промывателей, термостатов и спектрофотометров

Рекомендации по качественной подготовке посуды для ИФА

JPEG - 15.6 кб
Рис.1. Отдельные емкости для разных реагентов

Посуду необходимо мыть, используя жидкие средства для мытья, не содержащие биодобавок. После мытья тщательно ополаскивать посуду проточной, а затем дистиллированной водой. Необходимо обязательно выделять разные емкости для работы с растворами конъюгатов и проявителей (рис. 1). Для манипуляций с растворами конъюгатов и проявителей необходимо использовать одноразовые наконечники.

Рекомендации по подготовке исследуемых образцов

Перед исследованием в ИФА сыворотку можно хранить в течение 72 часов в холодильнике при 2-8°C. Если нет возможности исследовать сыворотки или плазмы в течение указанного времени, их необходимо заморозить при температуре 20°C или ниже.

Образцы сывороток должны быть прозрачными, без признаков гемолиза, выраженной гиперлипидемии и бактериемии.

Для получения корректного результата при исследовании сывороток в динамике заболевания необходимо создать банк сывороток первичного забора, замораживая их при-20 °C или ниже.

Условия проведения ИФА

JPEG - 43.9 кб
Рис. 2. Заполнение протокола исследования

При постановке анализа температура в помещении лаборатории должна составлять 18-25 °С.

Не допускается наличие в лаборатории паров любых окислителей (открытых емкостей с растворами пероксида водорода, гипохлорита и др.) и хлорсодержащих растворов.

В процессе проведения ИФА необходимо использовать качественную дистиллированную воду, которая хранится не дольше двух суток.

Недопустимо повторное использование планшетов тест-систем для любой другой работы.

Качественная работа диагностических наборов гарантирована только в пределах указанного срока годности при соблюдении указанных условий хранения тест-наборов.

Необходимо ограничить попадание прямых солнечных лучей на лунки планшета.

Перед началом проведения анализа необходимо заполнить протокол исследования (рис. 2)

Если при внесении исследуемого образца произошла ошибка, например, две сыворотки внесли в одну лунку, такую ​​лунку забраковывают. При этом в схеме внесения образцов необходимо сделать пометку, какая именно лунка содержит брак. Время заполнения всех необходимых лунок не должно превышать 15-20 мин.

Соблюдение температурного режима и времени инкубации

Инкубацию планшета на всех этапах ИФА проводят при температуре, указанной в инструкции, при этом комнатной считается температура 18-25°С.

Не инкубируйте планшеты в термостате, устанавливая их один на один, так как неравномерный прогрев планшета в этом случае приведет к появлению краевого эффекта - повышенного фона по периметру планшета (рис. 3, 4).

JPEG - 11.1 кб
Рис. 3. Неправильное установление
JPEG - 17.5 кб
Рис. 4. Правильное установление

Основные правила работы с автоматической пипеткой

JPEG - 12.7 кб
Рис. 5. Правильное и неправильное положение пипетки

Погрузите наконечник на 2-3 мм в биологическую жидкость и нажмите на операционную кнопку до первого упора. Не вынимая наконечник из жидкости, осторожно отпустите кнопку в исходное положение. Погрузите наконечник на 2-3 мм в раствор, в который необходимо перенести набранную жидкость, нажмите кнопку до первого упора. Не меняя положения пипетки, плавно отпустите кнопку в исходное положение. Таким образом наконечник заполнится для перемешивания. Повторите эту процедуру 2-3 раза. Нажмите операционную кнопку до второго упора для полного освобождения от жидкости. Выньте наконечник из раствора и отпустите операционную кнопку в исходное положение. Снимите наконечник с пипетки с помощью механизма для снятия наконечников. Замените наконечник и продолжайте работу с последующим образцом биологической жидкости.

Для лучшего контроля за внесением компонентов планшет желательно ставить на белый фон.

При работе с восьмиканального пипеткой следует обращать внимание на равномерность заполнения жидкостью всех наконечников пипетки (рис. 6).

Контрольные и опытные образцы вносить необходимо осторожно, пипетируя смесь в лунках, при этом наконечник не должен касаться дна лунки.

Промывание планшета

Качественное промывание планшета - один из выдающихся факторов при проведении иммуноферментного анализа.

Режим промывки должен строго соответствовать требованиям инструкции. Необходимо следить за равномерным заполнением всех лунок планшета, а также обращать внимание, чтобы не было перетекания промывочного раствора из одной лунки в другую.

Время экспозиции планшета с промывочным раствором на каждом этапе промывки должно составлять не менее 30 секунд, если нет дополнительных требований в инструкции.

Для предупреждения загрязнения промывателя (вошера) необходимо ежедневно промывать его дистиллированной водой, а еженедельно - 30% раствором этилового спирта.

Самая частая причина ошибок - загрязнение каналов промывателя или пространства между иголками кусочками марли, ваты или кристаллами солей.

Раствор проявителя непосредственно перед использованием должен быть прозрачным и бесцветным. Остатки раствора в ванночке рекомендуют не выливать до окончания инкубации планшета с проявителем. Проявитель, оставшийся в ванночке, не должен изменять цвет в течение 30 мин; появление окраски раствора проявителя свидетельствует о его загрязнении.

Очень важным фактором, который влияет на проведение ИФА и позволяет получать корректные результаты, является точность работы оборудования - автоматических пипеток, термостатов и спектрофотометров.