Обеспечение качества лабораторных исследований
Необходимость получения надежных и достоверных результатов в различных лабораториях привела к необходимости создания многоуровневой системы контроля качества лабораторных исследований.
На сегодняшний день обеспечение качества исследований осуществляется на уровне государственной системы здравоохранения, на уровне предприятия-производителя ИФА тест-наборов и на уровне отдельной диагностической лаборатории.
Обеспечение качества на уровне государственной системы здравоохранения
Всемирная организация здравоохранения обращает внимание на то, что национальные органы здравоохранения в каждой стране должны прилагать все усилия для формирования критериев качества лабораторных тестирований, включающий:
- лицензирование (регистрацию) средств диагностики in vitrо
- посерийный контроль изделий для in vitrо диагностики
- проведение регулярного повторного контроля IVD средств
Эти критерии должны гарантировать присутствие на рынке продуктов высокого качества со стабильными показателями на всех производственных сериях тест-систем.
Основные характеристики, определяющие качество диагностических средств - чувствительность, специфичность и воспроизводимость анализа.
Оценка и контроль качества in vitrо средств диагностики особенно важны для диагностики инфекционных маркеров ВИЧ, гепатитов А, В и С, парвовируса В19.
При оценке чувствительности теста различают диагностическую и аналитическую чувствительность анализа. Диагностическая чувствительность - это способность тест-системы выявлять максимально возможное количество инфицированных пациентов, то есть проявлять положительные образцы без ложноотрицательных результатов. Аналитическая чувствительность - это способность тест-системы выявлять минимально возможное количество искомого вещества.
Специфичность - это способность тест-системы обнаруживать только искомое вещество, т.е. определять негативные образцы без ложноположительных результатов.
Для оценки диагностических характеристик тест-систем применяют референс-материалы, среди которых:
- панели охарактеризованных сывороток, содержащих и не содержащих определенный инфекционный маркер (Low Titer, Mixed Titer Panels)
- сероконверсионные панели - набор образцов, полученных от одного пациента с определенным интервалом времени
- международные стандарты - биологический материал, который охарактеризован по определенному маркеру в единицах СИ или международных единицах
- панели определения чувствительности - последовательно разведены образцы с известным содержанием определенного маркера
- образцы сывороток, полученных от жителей региона, где будет применяться тест-система.
ВОЗ обеспечивает международные референс-материалы, которые способствуют глобальной гармонизации правил, которые используются для методов анализа, применяемых в службе переливания крови при диагностике заболеваний. В 2003 году ВОЗ выпустила второй международный стандарт на HBsAg, количественное содержание HBsAg в нем охарактеризованы в международных единицах, а не в нанограммах на миллилитр. В паспорте на этот стандарт ВОЗ настоятельно рекомендует оценивать границу чувствительности тест-систем в МЕ/мл вместо нг/мл, поскольку стандарты HBsAg различного производства не совпадают по концентрации в нг/мл. Тест-системы для выявления HBsA, одобренные FDA и имеют СЕ маркировки, характеризуются пределом чувствительности 0,1 МЕ/мл.
Регистрация иммуноферментных тест-систем в Украине
С августа 2006 года в Украине, как и во всех странах Европы, иммуноферментные тест-системы отнесены к группе изделий медицинского назначения. Регистрация ИФА тест-систем проводится Государственной службой лекарственных средств и изделий медицинского назначения.
Регистрация и контроль качества тест-систем в нашей стране проходит в три этапа:
- Доклинические исследования
- Технические испытания
- Клиническое испытание
Все этапы исследований проводятся уполномоченными экспертными учреждениями.
Пострегистрационный контроль качества проводится со стороны государства при квалификационных испытаниях, а периодический посерийный контроля качества тест-систем осуществляется предприятием-изготовителем.
Обеспечение качества на уровне предприятия-изготовителя
Во время производства иммуноферментных тест-систем обязательным является проведение постоянного контроля качества следующих компонентов:
- сырья и материалов - полистироловых планшетов, химических реактивов, антигенов и антител
- промежуточных продуктов - ИФА-планшетов, иммуноферментных конъюгатов, растворов для разведения сывороток, конъюгата, ТМБ-субстрата, внутренних калибраторов
- готовой продукции:
- контроль каждой серии готовой продукции с использованием международных референс-материалов - международных, коммерческих панелей сывороток, контрольных панелей предприятия
- анализ внутрисерийной и междусерийной воспроизводимости
- контроль музейных образцов продукции в течение всего срока годности тест-систем
Воспроизводимость - это способность тест-системы давать стабильный результат при многократном тестировании одного и того же образца. Воспроизводимость оценивается путем расчета коэффициента вариации (CV), для тест-систем высокого качества этот показатель не должен превышать 20%. Коэффициент вариации иллюстрирует возможное отклонение оптической плотности от среднего значения при серийных постановках одного и того же образца.
Обеспечение качества на уровне отдельной лаборатории
Контроль качества лабораторной диагностики на уровне конкретного потребителя (диагностической лаборатории) включает обязательное участие в программах внешней оценки качества работы и внутрилабораторный контроль качества.
Внутрилабораторный контроль качества включает:
- Корректное проведения иммуноферментного анализа
- Определение качества тест-систем, которые используются (чувствительность, специфичность, воспроизводимость)
- Соблюдение условий сбора и хранения проб
- Входной контроль каждой серии тест-систем
- Использование внутренних контрольных материалов для постоянного контроля воспроизводимости результатов ИФА
- Соблюдение правил безопасности в лаборатории
- Правильное ведение документации.
Результат ИФА в первую очередь зависит от:
- времени инкубации (сигнал оптической плотности прямо пропорционален времени инкубации)
- температуры инкубации (сигнал ОП пропорционален температуре инкубации)
- качества промывки планшета (неправильное промывание планшета приводит к появлению ложноположительных результатов)
- условий хранения тест-систем (нарушение условий может приводить к снижению иммунореактивности твердой фазы и конъюгата (снижение сигнала ОП на положительных сыворотках) и денатурации белков на твердой фазе, что влечет появление неспецифических реакциий- повышение ОП отрицательных сывороток)
Внешние факторы, влияющие на результат ИФА
- Качество пипетирования и внесения растворов
- Качество инкубации:
- Соблюдение или несоблюдение времени инкубации
- Точность температуры
- Однородность температуры в инкубаторе
- Кинетика нагрева
- Качество промывки:
- Чистота используемой воды
- Объем внесенного промывочного раствора
- Давление, под которым раствор вносится в лунки
- Время "отмачивания" раствора в лунках планшета
- Качество учета результатов ОП - точность и воспроизводимость ридера.
